聚合酶链反应技术(PCR)全面解析与应用指南
该思维导图展示了聚合酶链反应技术(PCR)的基本原理和特点,包括其体外扩增 DNA 的定义、循环步骤及反应体系的核心成分。PCR 具有高特异性、高灵敏度和操作简便等优点,同时强调了对反应条件的优化,比如变性、退火和延伸的温度与时间。还介绍了产物的鉴定方法及多种常用 PCR 技术,如逆转录 PCR 和定量 PCR。整体上,PCR 技术在分子生物研究中具有重要应用。
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# 聚合酶链反应技术(PCR)全面解析与应用指南
- PCR 基本原理
- 定义
- 体外扩增特定 DNA 片段技术
- 变性、退火、延伸循环
- 产物称扩增子
- 循环步骤
- 变性
- 温度:95℃
- 作用:DNA 双链解旋为单链模板
- 退火
- 温度:约 55℃
- 作用:引物与模板 3’端结合
- 延伸
- 温度:72℃
- 作用:DNA 聚合酶合成互补链
- 循环特点
- 循环次数:30 次
- 理论扩增:2^{30}倍
- 实际效率:75% - 85%
- 完成时间:约 1 小时百万倍扩增
- PCR 特点
- 特异性高
- 灵敏度高
- 简便快捷
- 样品包容性强
- PCR 反应体系
- 核心成分
- DNA 聚合酶
- 引物
- dNTP
- 模板
- 反应体系优化
- 物质配置
- 浓度调节
- PCR 条件优化
- 变性条件
- 温度调整
- 时间控制
- 退火条件
- 温度调整
- 时间控制
- 延伸条件
- 温度调整
- 时间控制
- 其他参数
- 循环次数
- 热启动策略
- PCR 产物鉴定
- 电泳分析
- 显示扩增产物大小
- 高效液相色谱
- 纯度检测
- 酶切分析
- 验证特异性
- 杂交分析
- 检测特定序列
- 序列分析
- 核酸序列确认
- 常用 PCR 技术
- 原位 PCR
- 在细胞内进行 PCR
- 多重 PCR
- 同时扩增多个目标序列
- 等位基因特异性 PCR
- 区分突变等位基因
- 逆转录 PCR(RT - PCR)
- 从 RNA 合成 cDNA 并扩增
- 定量 PCR(qPCR)
- 实时监测扩增过程
- 特殊 PCR 补充
- 数字 PCR
- 冷激 PCR
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